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氨芐青霉素
快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
一、原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氨芐青霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗氨芐青霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氨芐青霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氨芐青霉素的含量。
二、試劑盒特性
組織 ················································ 2ppb
氨芐青霉素· ········································ 100%
氨芐氨芐青霉素········································ 0.8%
鄰氯氨芐青霉素 ······································· 0.2%
雙氯氨芐青霉素 ······································· 0.1%
阿莫西林 ········································· 0.1%
頭孢塞呋 ········································· 0.1%
組織 ········································· 60%-120%
三、試劑盒組成
1 | 微量測(cè)試孔 | 每條8孔,一板12條 | |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.1ppb |
0.3ppb | 0.9ppb | ||
2.7ppb | 8.1ppb | ||
3 | 酶標(biāo)記物 | 12ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍(lán)色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 10X濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱
微量移液器:?jiǎn)蔚?nbsp;20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl
試 劑:氫氧化鈉、濃鹽酸
五、樣本前處理步驟
(a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。
(b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
配液 1 0.2M 鹽酸
取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L
配液 2 1 M 氫氧化鈉
稱(chēng) 4g 氫氧化鈉固體加去離子水定容至100ml
配液 3 樣本稀釋液
將10X濃縮復(fù)溶液與去離子水 1:9 稀釋后用
1、稱(chēng) 1±0.05g 均質(zhì)后的組織至50ml離心管中,加入2ml 0.2M鹽酸(見(jiàn)配液1),充分振蕩3min;
2、再加入400µl 1M 氫氧化鈉(見(jiàn)配液2)溶液和1.6ml樣本稀釋液(見(jiàn)配液3)溶液,充分振蕩3min,室溫4000r/min 以上離心 5min;
3、取上清液,用樣本稀釋液按1:2(50µl樣本液加100µl樣本稀釋液)稀釋?zhuān)旌?0s;取50 µl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):15
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氨芐青霉素量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.1ppb為1.816;0.3ppb為1.415;0.9ppb為0.74;2.7ppb為0.313;8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb~8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb~0.9ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氨芐青霉素實(shí)際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氨芐青霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氨芐青霉素實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。
八、 注意事項(xiàng)
九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期
提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。