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氨芐青霉素酶聯(lián)免疫試劑盒
說明書
一、藥物概述及檢測原理
氨芐青霉素類抗生素廣譜的抗菌特性,為動(dòng)物疾病的防治提供了、低毒的有力武器,被大量應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)。人食用了氨芐青霉素殘留的動(dòng)物源食品會(huì)對(duì)身體造成一定危害甚至產(chǎn)生嚴(yán)重的過敏反應(yīng),所以對(duì)氨芐青霉素殘留的有效監(jiān)測已成為保障食品安全的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。
操作流程本公司的氨芐青霉素酶聯(lián)免疫試劑盒使用zui新生物技術(shù)開發(fā),具有方便、快速、靈敏等特點(diǎn)。
本試劑盒利用氨芐青霉素抗體與氨芐青霉素可產(chǎn)生特異性結(jié)合的性質(zhì),先在酶標(biāo)板上預(yù)包被抗原,再加入標(biāo)準(zhǔn)品(樣本)和氨芐青霉素抗體,樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的氨芐青霉素藥物與固定在酶標(biāo)板上的抗原競爭氨芐青霉素抗體,后加入底物催化顯色。此時(shí)顯色深度與標(biāo)準(zhǔn)品(樣本)中氨芐青霉素藥物的含量成反比。
二、試劑盒內(nèi)包含組分:
標(biāo)準(zhǔn)品工作液:0 ppb、0.5 ppb、1.5 ppb、4.5 ppb、13.5 ppb,500ppb,1 mL/瓶。
96孔酶標(biāo)板:1塊
氨芐青霉素抗體工作液:1瓶(7mL/瓶)
酶標(biāo)Ⅱ抗工作液:1瓶(12 mL/瓶)
20×濃縮洗滌液:1瓶(30 mL/瓶)
2×濃縮復(fù)溶液:1瓶(60mL/瓶)
底物A液:1瓶(7 mL/瓶)
底物B液:1瓶(7 mL/瓶)
終止液:1瓶(7mL)
說明書
蓋板膜
自封袋
三、用戶需要自備的設(shè)備和試劑
儀器:
v 酶標(biāo)儀(檢測波長450 nm、630 nm)
v 電子天平(精度:0.01 g)
v 離心機(jī)(4000 g及以上)
v 生化培養(yǎng)箱(可調(diào)25℃)
v 搖床
v 旋渦振蕩器
v 氮吹儀
v 微量移液器:(20μl-200μl、100μl-1000μl各一支、30-300ul八道排槍)
v 計(jì)時(shí)器
試劑:
v 乙腈
v 氫氧化鈉
v 正己烷
v 去離子水
四、試劑盒特異性
試劑盒與其他藥物的交叉反應(yīng)率:
v 氨芐青霉素…………………………………100%
五、樣本檢測步驟
1. 工作液準(zhǔn)備
v 0.1M 氫氧化鈉溶液(組織提取用):稱取0.4g氫氧化鈉加入100ml去離子水溶解混勻。
v 乙腈-0.1M 氫氧化鈉溶液(組織提取用): 量取84ml乙腈加入16ml 0.1M 氫氧化鈉溶液中,混勻。
v 復(fù)溶工作液:取1份2×濃縮復(fù)溶液加去離子水1份按照1:1的比例稀釋即得。
v 洗滌工作液:取1份20×濃縮洗滌液加去離子水19份按照1:19的比例稀釋即得。
2. 樣品前處理
組織方法一(雞肉、豬肉、魚、蝦)(稀釋倍數(shù):4)
Ø 用均質(zhì)器均質(zhì)組織樣本;
Ø 稱取1±0.05g均質(zhì)后的組織樣本至50ml聚苯乙烯離心管中, 加入4ml乙腈-0.1M氫氧化鈉溶液(見5.1),用振蕩器振蕩10min,3000g室溫離心10min;
Ø 移取1ml上清液至10ml潔凈干燥玻璃管中,于60℃水浴氮?dú)饬飨麓蹈桑?/span>
Ø 加入1ml正己烷,用渦旋儀渦動(dòng)30s,溶解干燥殘留物,再加入1ml復(fù)溶工作液(見5.2),用渦旋儀渦動(dòng)30s,充分混勻后轉(zhuǎn)入2ml聚苯乙烯離心管中,3000g室溫離心5min;
Ø 除去上層有機(jī)相,取下層50μL 用于分析。
Ø 注:批量檢測樣本時(shí)使用本公司代理配套的GK-201型有機(jī)相吸除器可使操作更加安全、方便、快捷。
組織方法二(雞肉、豬肉、魚、蝦)(稀釋倍數(shù):20)
Ø 用均質(zhì)器均質(zhì)組織樣本;
Ø 稱取1±0.05g均質(zhì)后的組織樣本至50ml聚苯乙烯離心管中, 加入4ml乙腈-0.1M氫氧化鈉溶液(見5.1),用振蕩器振蕩10min,3000g室溫離心10min;
Ø 移取1ml上清液至10ml潔凈干燥玻璃管中,于60℃水浴氮?dú)饬飨麓蹈桑?/span>
Ø 加入1ml正己烷,用渦旋儀渦動(dòng)30s,溶解干燥殘留物,再加入1ml復(fù)溶工作液(見5.2),用渦旋儀渦動(dòng)30s,充分混勻后轉(zhuǎn)入2ml聚苯乙烯離心管中,3000g室溫離心5min;
Ø 除去上層有機(jī)相,取下層水相與復(fù)溶工作液(見5.2)按1:4體積比進(jìn)行稀釋(50μL樣本液+200μL復(fù)溶工作液);
Ø 取50μL用于分析。
Ø 注:批量檢測樣本時(shí)使用本公司代理配套的GK-201型有機(jī)相吸除器可使操作更加安全、方便、快捷。
3. 檢測
Ø 準(zhǔn)備:將要使用的酶標(biāo)板條插入酶標(biāo)板架上,并記錄各標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,為減小檢測值波動(dòng)建議做雙孔平行實(shí)驗(yàn)(每個(gè)樣本/標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)兩孔),未使用的酶標(biāo)板條用自封袋密封后,保存于2-8℃環(huán)境中以防變質(zhì);
Ø 加樣:向?qū)?yīng)微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品工作液/樣品溶液50 μL,向每孔中加入50 μL抗體工作液;
Ø 孵育:輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s,使孔內(nèi)液體充分混勻后,蓋好蓋板膜于25℃避光反應(yīng)30 min;
Ø 洗滌:取出酶標(biāo)板后小心揭開蓋板膜,倒出板孔中液體后,在每孔加250 μL洗滌工作液,浸泡15-30s后倒掉洗滌工作液,然后再加入洗滌工作液重復(fù)洗滌3~4次后,將酶標(biāo)板倒置于吸水紙上,用力拍干;
Ø 加樣:向每孔中加入100 μL酶標(biāo)二抗工作液;
Ø 孵育:輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s,使孔內(nèi)液體充分混勻后,蓋好蓋板膜于25℃避光反應(yīng)30 min;
Ø 洗滌:取出酶標(biāo)板后小心揭開蓋板膜,倒出板孔中液體后,在每孔加250 μL洗滌工作液,浸泡15-30s后倒掉洗滌工作液,然后再加入洗滌工作液重復(fù)洗滌3~4次后,將酶標(biāo)板倒置于吸水紙上,用力拍干;
Ø 顯色:在每孔中加入100 μL 底物A和底物B的混合液(注:底物A液、底物B液必須按體積1:1充分混合,混合液在10 min內(nèi)使用,切不可使用金屬容器盛裝、攪拌試劑以免底物變質(zhì)失效);
Ø 孵育:輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s,使孔內(nèi)液體充分混勻后,蓋好蓋板膜于25℃避光反應(yīng)15 min;
Ø 終止:在反應(yīng)后的微孔中加入終止液50μL/孔,底物液由藍(lán)變黃表明終止成功。
Ø 讀數(shù):終止后的酶標(biāo)板應(yīng)在5 min內(nèi)用酶標(biāo)儀讀數(shù),建議使用450 nm、630 nm雙波長讀取酶標(biāo)板吸光度值。
4. 計(jì)算結(jié)果
Ø 設(shè)各標(biāo)準(zhǔn)品(或樣品)的吸光度平均值為B,零標(biāo)準(zhǔn)(濃度為0 ppb的標(biāo)準(zhǔn)品)吸光度平均值B0以(B/B0)×100%為各標(biāo)準(zhǔn)品(或樣品)對(duì)應(yīng)的吸光度的百分比:
Ø 使用半對(duì)數(shù)系統(tǒng)代入標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的吸光度的百分比,與標(biāo)準(zhǔn)品濃度擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Ø 將待檢樣品吸光度的百分比代入擬合出的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中,即可得出樣品對(duì)應(yīng)的濃度,后乘以樣品相應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中檢測物含量。
六、試劑盒參數(shù)
Ø 試劑盒靈敏度:0.5ppb;
Ø 標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍:0.5ppb-13.5ppb;
Ø 板內(nèi)變異系數(shù):<5%;
Ø 板間變異系數(shù):<15%;
Ø B0吸光度zui佳值:>0.8;
Ø 回收率:60%±20%
Ø 樣品低檢測限:
組織方法一……………………………約3ppb
組織方法二……………………………約10ppb
注:ppb=ng/mL或ng/g。
七、分析限制
本試劑盒為定量或半定量試劑盒,建議用于大量樣本篩查分析。若檢測結(jié)果為陽性,建議使用儀器方法開展確證實(shí)驗(yàn)(如GC/MS、LC-MS/MS等)。
八、試劑盒貯存條件
試劑盒ZUI佳貯存溫度為2-8℃,切勿凍存。
未使用完的酶標(biāo)板條須密封保存2-8℃的環(huán)境中。
九、注意事項(xiàng)
使用試劑盒前,請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀說明書。
試劑盒使用前,需將盒內(nèi)各組份置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上回溫至室溫(25±2℃)(提示:約1 h)。
試劑在使用前許搖勻,混合時(shí)應(yīng)避免出現(xiàn)氣泡。
槍頭為一次性用品,為防止試劑交叉污染,檢測過程中所用槍頭不得重復(fù)使用。
請(qǐng)勿使用過期試劑盒,不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用。
樣品處理完畢后請(qǐng)立即分析,否則可能影響檢測結(jié)果。
底物A液、底物B液均為無色透明液體,若在使用前已變成藍(lán)色,或混合后立即變藍(lán),說明試劑已污染或變質(zhì)。
加樣過程在保證精度的前提下一定要迅速,以免反應(yīng)時(shí)間差對(duì)檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。
終止液中含有硫酸,若不小心濺上皮膚或衣物請(qǐng)立即用大量清水沖洗。若不慎ru眼,請(qǐng)?jiān)?清洗后去醫(yī)院檢查。
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