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氯霉素快速檢測試劑盒說明書
更新時間:2020-05-13 點擊量:2063

氯霉素

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氯霉素將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氯霉素抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氯霉素的含量成負相關(guān),與標準曲線比較即可得出相應殘留物氯霉素的含量。

二、試劑盒特性

  • 試劑盒靈敏度:   0.02ppb
  • 孵育溫度:       25
  • 孵育時間:       30min15min
  • 樣本檢測限

組織、蜂蜜、牛奶···································· 0.1ppb

奶粉、蛋類、尿樣、飼料··························· 0.15ppb

  • 交叉反應率

氯霉素 ·············································· 100%

甲砜霉素 ········································· < 0.1%

氟甲砜霉素 ······································ < 0.1%

  • 樣本回收率

組織、蛋類、奶粉·····························  85%±20%

蜂蜜、牛奶、飼料·····························  93%±25%

尿樣··········································  100%±25%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12條

2

標準液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.02ppb

0.06ppb

0.18ppb

0.54ppb

1.62ppb

3

酶標記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作

7ml

藍色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

2X濃縮復溶液

50ml

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱

微量移液器:單道 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

      劑:乙酸乙酯、正己烷

五、樣本前處理步驟

  • 樣本處理前須知

a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

  • 樣本前處理需配制:

配液1  樣本復溶液:

2X濃縮復溶液用去離子水按11稀釋。

  • 樣本處理:

a肌肉組織樣本處理方法

  • 稱取均質(zhì)后的新鮮樣本3±0.05g50ml離心管中,加入3ml去離子水后再加入6ml乙酸乙酯,振蕩1min,室溫4000r/min以上離心10min;
  • 取出4ml上層液體在50-60氮氣流中吹干; 
  • 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加1ml樣本復溶液混合30s,室溫4000r/min以上離心10min;去除上層有機相;
  • 50 µl下層相用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  0.5 

此方法無法檢測肝臟類樣本,處理時易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,影響檢測結(jié)果(乳化時建議處理方法:去除上層有機相再加入2ml正己烷混合30s,室溫4000r/min以上離心10min;去除上層有機相)。

b)蜂蜜處理方法

  • 2±0.05 g蜂蜜,放入離心管中,用2ml去離子水溶解;加入6ml乙酸乙酯振蕩1min,室溫4000r/min以上離心10min
  • 移取3ml上層清澈液到另一離心管中,50-60氮氣流下干燥;用0.5ml樣本復溶液溶解干燥的殘留物,混合30s;
  • 50 µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  0.5  

c牛奶、奶粉、蛋類樣本處理方法

  • 稱取均質(zhì)后的新鮮樣本2±0.05g(或2ml)50ml離心管中,加入6ml乙酸乙酯,振蕩1min,室溫4000r/min以上離心10min
  • 取出3ml上層液體在50-60氮氣流中吹干; 
  • 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加1ml樣本復溶液混合30s,室溫4000r/min以上離心10min;去除上層有機相;
  • 50 µl下層相用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  1 

處理時如無法取到3ml上層液體,可以重復離心后再取液,或加入10ml乙酸乙酯后取5ml吹干,稀釋倍數(shù)不變

d尿樣、飼料樣本處理方法

  • 稱取均質(zhì)后的新鮮樣本1±0.05g(或1ml)50ml離心管中,加入6ml乙酸乙酯,振蕩1min,室溫4000r/min以上離心10min;
  • 取出3ml上層液體在50-60氮氣流中吹干; 
  • 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加1ml樣本復溶液混合30s,室溫4000r/min以上離心10min;去除上層有機相;
  • 50 µl下層相用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  2 

六、 酶標免疫分析程序:

  • 測定前應須知:
  • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。
  • 使用之后立即將所有試劑放回28。
  • ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
  • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
  • 操作步驟:
  • 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8。
  • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
  • 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
  • 加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加入酶標記物50µl/,zui 后加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。25環(huán)境中反應30min
  • 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  • 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min。
  • 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氯霉素量成負相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb2.143 0.02ppb1.816;0.06ppb1.415;0.18ppb0.740.54ppb0.313;1.62ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是0.54ppb1.62ppb;樣本2的濃度范圍是0.06ppb0.18ppb,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以di一個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

2)標準曲線的繪制與計算

以標準品百分吸光率為縱坐標,以氯霉素標準品濃ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。(歡迎索?。?/span>

八、 注意事項

  • 室溫低于25或試劑及標本未回到室溫(2025)會導致所有標準的OD值偏低。
  • 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
  • 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
  • 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
  • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
  • 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
  • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。
  • 該試劑盒zui 佳反應溫度為25,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

  • 儲藏條件:試劑盒于2-8保存,不要冷凍。
  •  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

 

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