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沙丁胺醇快速檢測試紙條使用說明書
更新時間:2020-07-02 點擊量:2858

沙丁胺醇

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物沙丁胺醇將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗沙丁胺醇抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物沙丁胺醇的含量成負相關(guān),與標準曲線比較即可得出相應殘留物沙丁胺醇的含量。

二、試劑盒特性

  • 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
  • 孵育溫度:       25
  • 孵育時間:       30min15min
  • 樣本檢測下限

尿             ······························· 0.1ppb

 織(處理法一) ····························· 0.4ppb

 織(處理法二) ····························· 0.1ppb

            ·······························  1ppb

  • 交叉反應率

沙丁胺醇(Salbutamol ·······················  100%

pu他林(Terbutalin   ·····················  <1%

克倫特羅(Clenbuterol  ·····················  <1%

萊克多巴胺(Ractopamine············ ······· <0.1%

  • 樣本回收率

尿        ·······························  95%±17%

        ·······························  75%±22%

        ·······························  80%±18%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12條

2

標準液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶標記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

10ml

藍色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

20×樣本提取液

50ml

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱、打印機

微量移液器:單道 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

      劑:乙酸乙酯、乙腈、氫氧化鈉、濃鹽酸、甲醇、無水硫酸鈉、正己烷

五、樣本前處理步驟

  • 樣本處理前須知

a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

  • 樣本前處理需配制:

配液1  0.1M HCl 溶液

0.86mlHCl加水定溶至100ml。

配液2  0.1M NaOH 溶液

稱取0.4g NaOH加水定溶至100ml

配液3  乙腈-0.1M HCl 溶液

        V乙腈VHCl =8416。

配液4  樣本提取液

        120×樣本提取液 + 19份去離子水混合均勻后用于組織樣本提取。

  • 樣本處理:

a尿樣本的處理方法

20µl清亮尿樣直接測定(如果尿樣渾濁一定要過濾或4000r/min離心10min,直至得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應冷凍保存。

樣本稀釋倍數(shù):  1

b)組織樣本的處理方法一

  • 2±0.05g均質(zhì)后的組織至50ml離心管中,加入6ml稀釋后的樣本提取液,充分振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min(注:若組織樣本中油脂含量較高,可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心)
  • 20µl上層液進行分析。 

樣本稀釋倍數(shù):  4 

c)組織樣本的處理方法二

  • 稱取 2 ± 0.05g 均質(zhì)后的組織于50ml離心管中,加入6ml乙腈-0.1MHCl,振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min;
  • 取上清3ml,加入2ml 0.1M NaOH,加入6ml乙酸乙酯,振蕩1min,室溫4000r/min 以上離心10min。取全部上清于5060℃氮氣流或空氣流吹干;
  • 加入1ml稀釋后的樣本提取液溶解干燥后的殘留物,混合30s
  • 20 µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  1  

d)飼料處理方法

  • 1.0±0.05g研碎的飼料樣品于50ml離心管中,加入10ml甲醇,再加入5g無水硫酸鈉,充分振蕩2min;15 4000r/min以上離心10min;
  • 吸出離心后的上清液1ml,于5060℃氮氣流或空氣流吹干,用1 ml稀釋后的樣本提取液溶解干燥后的殘留物,再加入1ml正己烷混合30s ;15 4000r/min以上離心5min;去除上層有機相;
  • 取下層20 µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):10     

六、 酶標免疫分析程序:

  • 測定前應須知:
  • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。
  • 使用之后立即將所有試劑放回28。
  • ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
  • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
  • 操作步驟:
  • 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于28。
  • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液
  • 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
  • 加標準品/樣本20µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標記物50µl/孔,再加入80µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境反應30min
  • 將孔內(nèi)液體甩干,用稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  • 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min
  • 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含沙丁胺醇量成負相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb2.243; 0.1ppb1.816;0.3ppb1.4150.9ppb0.74;2.7ppb0.313;8.1ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb0.9ppb,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中沙丁胺醇實際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第yi個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

2)標準曲線的繪制與計算

以標準品百分吸光率為縱坐標,以沙丁胺醇標準品濃ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中沙丁胺醇實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。(索?。?/span>

八、 注意事項

  • 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫(2025℃)會導致所有標準的OD值偏低。
  • 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
  • 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
  • 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
  • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
  • 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
  • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。
  • 該試劑盒jia反應溫度為25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

  • 儲藏條件:試劑盒于28保存,不要冷凍。
  •  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

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