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酶活性檢測實(shí)驗(yàn)常見有幾種方法?
更新時(shí)間:2022-11-17 點(diǎn)擊量:734
  酶活性檢測實(shí)驗(yàn)常見的方法:
 
  1)定時(shí)法:(兩點(diǎn)法)
 
  通過測定酶反應(yīng)開始后某一時(shí)間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開始的時(shí)間。
 
  酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時(shí)間,通過加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白沉淀劑等,使反應(yīng)停止(也叫中止反應(yīng)法)。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應(yīng)呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。
 
  該法較基本的一點(diǎn)是停止反應(yīng)后才測定底物或物的變化。
 
  優(yōu)點(diǎn):簡單易行,對試劑要求不高。
 
  缺點(diǎn):難保證測定結(jié)果的真實(shí)性。
 
  難以確定反應(yīng)時(shí)間段酶促反應(yīng)是否處于線性期。隨著保溫時(shí)間的延續(xù),酶變性失活加速。
 
  (2)連續(xù)監(jiān)測法:
 
  又稱為動力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。
 
  在酶反應(yīng)過程中,用儀器監(jiān)測某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變,通過計(jì)算求出酶反應(yīng)初速度。
 
  連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)連續(xù)測得的數(shù)據(jù),可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計(jì)算酶活力。
 
  因此連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定時(shí)法更準(zhǔn)確。
 
  實(shí)際工作中,采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理應(yīng)用較廣、較頻繁測酶活性濃度的方法。
 
  (3)平衡法:
 
  通過測定酶反應(yīng)開始至反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點(diǎn)法。

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