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單克隆抗體制備服務(wù)

單克隆抗體制備服務(wù)

產(chǎn)品型號:

所屬分類:免疫學(xué)實驗

產(chǎn)品時間:2024-08-30

簡要描述:單克隆抗體制備服務(wù)
收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
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詳細(xì)說明:

提供商:    上海研謹(jǐn)生物

服務(wù)名稱:        單克隆抗體制備服務(wù)

規(guī)格:               實驗服務(wù) 

 

單克隆抗體(MAb)是針專- -的抗原決定簇產(chǎn)生的抗體,單克隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)起源于1975年,由G. KOhler和Milstein創(chuàng)立。主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞雜交融合成雜交瘤細(xì)胞,生產(chǎn)抗體。

 

雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗是針對體的主要步驟包括:

(1 )抗原制備,

(2)免疫動物,

(3)免疫脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備,

(4)細(xì)胞融合;

(5)雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng),

(6)雜交瘤細(xì)胞的篩選;

(7)雜交瘤細(xì)胞的克隆化;

(8)單克隆抗體的檢定;

(9)分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立:

(10)單克隆抗體的大量制備。

 

下面簡要介紹單克隆抗體的制備過程:

1、免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過程。一般選用6- 8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射??乖ㄟ^血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。

2、細(xì)胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合, 并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。

3、選擇性培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融臺的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。 在HAT培養(yǎng)基中,未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,不能利用補救途徑合成DNA而死亡。未融臺的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得 了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性,因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。

4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細(xì)胞,只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞,因此,必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法,篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞,并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。

經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子后,及時進(jìn)行凍存。

5、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。

(1)體內(nèi)誘生法取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0. 5ml液體石臘或降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周,可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可獲得大量單克隆抗體。

(2)體外培養(yǎng)法將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細(xì)胞及其碎片,即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。近年來,各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),大大提高了抗體的生產(chǎn)量。雜交瘤細(xì)胞融合后,要進(jìn)行篩選后才能使用。雜交瘤細(xì)胞分為兩次:一、篩選出雜交瘤細(xì)胞;二、 在初選的雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞,這兩次篩選的方法和原理各不相同。

 

 

實驗代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細(xì)胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實驗



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